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    1. 今天是:2022年12月15日
      首頁   >   技術文章   >   良好的實驗動物給藥和采血規范指南

      良好的實驗動物給藥和采血(包括途徑和體積)規范指南
       
      該文為歐盟制藥工業協會(EFPIA)和歐洲替代動物實驗方法驗證中心(ECVAM)之間的初步研究結果。其目的在于為安全性評價實驗室的研究者提供最新的易于使用的數據庫以幫助研究設計過程,同時最大可能地考慮到實驗動物的福利。
       
      盡管該文針對的是歐洲制藥工業界的研究者,但支撐該數據庫的基本原理及改進建議同樣適用于所有在他們的研究中使用這些動物實驗技術的人,不論是研究所、大學或其它行業中的研究者。
      有關供試品給予和采血的出版物眾多,且許多實驗室在多年的經驗和實踐基礎之上亦發展了它們自己的內部指南。在歐盟化妝品標準86/609EEC中,我們有義務簡化實驗以最小化動物的緊張程度。我們希望該文能夠對那些負責方案設計和審核的研究者提供有用的背景數據。
       
      該文基于歷年所有可能收集到的同行評議出版物,但我們未能夠收集到的內部數據和那些工作組的經驗(以及行業提交的有用的注釋)除外。該指南亦強調了持續性簡化與給藥和采血有關的技術的必要性,并且建議該如何去進行這方面的工作。應該鼓勵實驗室間的數據共享以避免重復性動物研究,以及共享在某些方法或其它情況下的藥物過量所引起的與動物福利有關的實際技術和科學問題。有必要對該指南中涉及到的正常動物要求進行特殊考慮,如妊娠和哺乳期間的動物。當給藥體積較大或過度采樣時對研究結果的詮釋可能會令人感到困惑,特別是使用麻醉動物時。
       
      良好的給藥規范指南
      引言
      各種科學研究都需要對實驗動物給藥以符合藥品注冊要求。特別是在制藥工業領域已研究了與動物福利以及科學性相一致的給藥水平。在新藥的臨床前安全性評價階段使用多種有效劑量以盡量確定必要的安全性范圍是一種常規慣例。在使用低毒或溶解性極差的化學藥品以一種可接受的制劑形式進行研究時,動物的個體給藥體積可能較大以滿足科學性和注冊的要求。擬用臨床劑量可能會使得給藥體積較大,超過了動物可接受的正常給藥體積,如靜脈內注射用的造影劑或血漿增容藥物。
      EFPIA/ECVAM技術小組的目標如下:
      (i)提供一個藥品注冊當局所要求的毒性研究中常規使用的實驗動物的給藥體積的指南;
      (ii)根據動物福利和實用性提供一個在良好規范條件下常規使用的一致性劑量水平;
      (iii)提供一個代表常規規范上限的劑量水平,以為特殊研究留下一定的劑量擴展余地。
      1表示最常使用的種屬的一般給藥途徑下的給藥體積。它們是根據發表的文獻和內部指南綜合得到的結果?,F在認為絨猴和小型豬在此類常用動物之列,因為它們在歐洲的使用日漸增加。
      每一列顯示了兩組數據,左側數據擬用來指導在單次或多次給藥的良好規范中的給藥體積;所給出的右側數據為可能的最大給藥值。如果超過了最大值就會涉及到動物福利或科學性,應當參考負責獸醫的外科醫生的意見。在某些實際運用,這些數據應符合藥典要求。
      從近來發表的文獻中已經得到了這些建議的最大值中的某些數據,但當與良好規范數據相比時顯得較高。強調了較高給藥體積時對動物福利和使用的原料制劑進行仔細關注的必要性,特別是擬進行重復給藥時。研究的持續時間和科學有效性應該讓步于由于給藥體積過高所出現的生理反應。因此在方案定稿以及著手研究之前通過比如監察員或倫理委員會充分地考慮到了這些出版物中的倫理觀要素。亦就倫理及科學依據強烈要求對任何新劑型進行物理化學相容性研究(體外)和小型的先導性研究(少量動物組)以免在大型研究中出現失誤。給藥體積應該最大限度地與化合物劑型和給藥準確性相一致。
      給藥途徑
      經口給藥途徑:某些情況下在給藥前有必要限制動物的攝食。該因素可能會影響藥物吸收。較大的給藥體積(40ml/kg)表明超過了胃容量負荷并快速通過胃進入小腸。較大的給藥體積亦可以造成食管返流。禁食時間取決于動物種屬的飼養方式、禁食的起始時間、種屬的生理學特征、給藥時間的長短、食物和光照周期。當藥液通過灌胃給予時,要求給藥必須準確以避免給藥意外。
      胃腸外給藥途徑:對于經胃腸外給予的藥物而言,應考慮所采用的制劑的給藥體積、給藥前和給藥后制劑的穩定性、pH、粘度、等滲性、緩沖能力、無菌及生物相容性因素。這對于多次給藥研究尤其重要。Claassen總結了這些因素中的某些細節。應使用最小型號的針頭、考慮給藥體積、注射物粘度、注射速度和動物種屬。
      皮下給藥:該途徑經常使用。吸收的速度和程度取決于制劑。
      腹腔內給藥:多次給藥研究時較少用到該途徑,因為可能會出現并發癥。該途徑存在著注射入腸道的可能,而且刺激性物質可能引起腹膜炎?;衔镆曰鞈乙盒问浇o予后在腹腔的吸收取決于藥物粒子及賦型劑的特征,藥物可能被吸收進行全身或局部循環。
      肌肉內注射:肌肉內注射可能會引起疼痛,因為注射時必須使肌纖維處于緊張狀態。必須對注射部位進行選擇以盡量減少神經損傷的可能性。多次給藥研究不應在同一個部位反復注射。當吸收速度很重要時,必須在水性和油性制劑之間加以選擇(油性制劑在注射部位的殘留很可能超過24小時。)。進行多劑量研究時,有必要考慮到出現炎癥及其后遺癥。
      靜脈內給藥:對于該途徑,必須區分團注、緩慢靜脈內注射和靜脈內輸液。表1中的數據與團注和緩慢靜脈內注射有關。
      (i)團注:在大多數采用靜脈內給藥途徑的研究中,受試物在大約1 min內快速給予。如此相對迅速的注射要求受試物與血液之間具有相容性且粘度不能太高。當需要給予較大的體積時,注射原料必須加熱至與體溫相同。在靜脈內給藥中注射速度是一個重要因素,建議對于嚙齒類動物而言,注射速度不應超過3ml/min。犬經靜脈內快速注射6ml /kg生理鹽溶液后未發現紅細胞壓積或心率變化,但快速注射20ml /kg后血液被稀釋了15%且出現一過性心動過速(一分鐘內心率增加達46%)。
          (ii)緩慢靜脈內注射:因為化合物預期的臨床適應癥或限制性因素如溶解性或刺激性,因此可能有必要考慮通過緩慢靜脈內注射給藥。特別需加以說明的是緩慢靜脈內注射會應用不同的技巧以盡可能地避免原料被注射入血管外組織。對于注射過程為5–10min的緩慢靜脈內注射而言,可能需要采用標準的或蝶形針,或淺靜脈內注射(適用于短期靜脈內注射)時使用靜脈內套管并用膠帶固定更佳,或在使用前通過外科手術放置注射針(適用于更長時間的注射或多次注射)。
      已有證據表明大鼠每日可以1ml/min的速度靜脈內注射等滲鹽溶液劑量達80ml/kg,共4天,沒有明顯不適癥狀或肺部損傷。但是,當注射時間增加至30天時,給藥速度為0.25、0.51.0ml/min的大鼠肺部損傷的發生率和嚴重程度均增加。在用藥早期可能出現不良反應,但是在這么短的時間內不會有病理變化出現。
      (iii)連續輸液:出于溶解性或臨床適應癥這一類似原因,有必要考慮連續輸液,如果長時間輸液則必須進行周詳的考慮。給藥體積和速度取決于所給物質并應考慮液體治療規范。作為一個指南,單次給藥情況下的給藥體積占循環血容積的10%時,給藥時間應不低于2小時。有關循環血容積的信息見表3。長時間輸液應考慮如何盡量減少動物的不適,這是一個關鍵因素。
      輸液的總持續時間亦是一個應該考慮的因素。表2給出了推薦的間斷性(4小時/)和持續性(24小時)輸液的給藥速度和體積(需要進一步的數據來完善此表)。
      家兔的給藥體積和速度基于來源于胚胎毒性研究的數據,該研究表明對胎兒沒有影響,但當給藥劑量>2 ml/kg/h時,母體出現血管周粒細胞成袖口狀聚集以及增殖性心內膜炎。大鼠的典型輸液速度在1–4 ml/kg/ h,但在胚胎毒性研究中的理想速度應不超過2ml/kg/h。對于小鼠、犬和恒河猴以及小型豬(未公開數據)的數據基于為期1個月的重復給藥研究。
      在四篇出版物中突出了其它表示高給藥體積時的賦型劑劑型的重要性的有限數據。這些數據表明對于靜脈內輸液的可耐受體積方面存在著巨大差異,取決于所使用的賦型劑。尚未研究對其它生理系統的長期影響。
      皮內給藥:該部位給藥主要用于評估免疫、炎癥或過敏反應。原料可以用佐劑配制。給藥體積為0.05–0.1 ml,取決于皮膚厚度。
      用于給藥的賦型劑
      在所有動物研究中,賦型劑的選擇均是一個重要的考慮因素。賦型劑本身應該給藥物提供最佳的暴露量而不應影響受試化合物的試驗結果,由此一個理想的賦型劑應該無生物活性,對化合物的生物物理特性沒有影響且對動物沒有毒性作用。如果賦型劑的成分之一具有生物學效應,則應該限制該賦型劑劑量,如此就能夠盡可能地減弱該賦型劑的這些效應或不會產生效應。給予化合物時所使用的簡單賦型劑包括等滲性水溶液、緩沖溶液、助溶系統、混懸液和油溶液。對于非水性注射液,再次給藥前應考慮藥物的吸收時間。當給予混懸液時,應考慮原料的粘度、pH和等滲性。使用助溶劑系統必須小心,因為賦型劑本身具有劑量限制性毒性。鼓勵實驗室根據開展的動物研究以及受試物特征來發展新的策略以促進最佳賦型劑的選擇。
      良好采血的規范指南
      引言
      采血為在實驗動物中執行的最常規程序之一,在BVA/FRAME/RSPCA/UFAW聯合工作組的第一次報告中總結了實驗哺乳動物和禽類的采血方法。該當前文章的目的在于根據可利用的最新信息提供一個易于使用的指南,并著重于毒代動力學以及毒理學(藥代動力學)研究的需要。從各種嚙齒類動物的眶后靜脈叢采血的方法仍然被廣泛使用,因為采用該方法會出現遺癥,因此描述了一種建議的替代途徑。
      循環血容量
      采血量根據準確的循環血容量數據計算。文獻綜述表明應考慮到這些數據的變異情況,可能與使用的技術、品系和動物性別等有關。引用最多的技術為同位素標記性紅細胞、同位素標記性轉鐵蛋白、同位素標記性血清白蛋白、標記用染料、酶稀釋法、光纖和右旋糖苷-70。
      3給出了在安全性評價研究中普遍使用的動物種屬的循環血容量。此處總結了在毒理學研究中使用得日漸頻繁的絨猴和小型豬的數據。顯示的數據根據不同來源并假定動物為成熟、健康并且營養充足的數據綜合而成。
      采血體積
      我們推薦的數據基于公開的研究結果,最近開展的研究以告知工作組有關某些問題的數據和正在被提交以供公開的數據以及來源于內部標準操作程序的信息。
      當采血量接近極限時動物福利為首要考慮的問題,但亦必須考慮動物的生理反應與科學性之間的沖突,因為這可能影響數據的闡釋和有效性。在可疑的情況下,監察員或獸醫應在采血前對動物表現出來的臨床癥狀進行評估。
      Scipioni等的工作表明24小時內大鼠的取血量達其總血容量的40%并重復取血2周后總體上不會引起致病性效應?;旧现挥猩倭坑嘘P取血后動物健康的臨界特征的數據,如心率、呼吸特征、各種激素水平以及行為特征如活動和移動自身所花的時間。所有這些均可能由于過度取血而出現變化,但研究這些變化需要耗費相當多的精力和資源。然而,血液學指標很易通過一個小型的研究來測定,采集不同體積的血量后,測定了動物的紅細胞數量(RBC)、血紅蛋白水平(HGB)、紅細胞壓積(HCT)、平均紅細胞容量(MCV)和紅細胞分布寬度(RDW)。在24小時內的取血體積占體重大約為250g的雄性和雌性SD大鼠(n=7)的循環血容量的7.5%、10%、15%20%(0.3-ml等分)以模擬動力學研究。隨后對動物進行追蹤觀察,總共29天。
      結果表明所有這些指標恢復到基線水平所花的時間存在相當大的差異,其中取血時間占循環血容量的15%20%的動物組中的某些指標(MCV, RDW)29天后未能恢復到基線水平。此處推薦的針對多次采血的恢復時間是指所有采血組中的大鼠恢復到正常水平(每只大鼠的初始水平加減10%)所耗的時間。推薦單次采血(如常規毒性研究要求如此)的體積不應超過循環血容量的15%,因為如果采血過快可能引起失血性休克。多次少量采血不大可能產生類似的急性效應。
      4反映了極限體積和足夠的恢復期并且考慮了多次采血后的應激性,整體嚴重性評估中的其它過程除外。該表著重于單次和多次采血體系。建議對毒性研究動物給予額外的恢復時間,因為在此類研究中必須嚴格評價血液學指標。
      計劃采用較高的體積(占循環血容量的20%)以利于毒代或藥代動力學的連續性采血,此處通常要求多次、少量取樣。但是,應該記住如此大體積采血對血液動力學的重大影響,可能影響半衰期的計算。如果最后一次采樣在處死動物的24小時內則有可能對終末半衰期進行評估。這些數據不包括最后一個樣本,該樣本為當動物最終被麻醉時能夠被采集的一個樣本。未考慮使用血液代用品,因為在推薦的采血體積下不允許使用此類人為干預。
      采用表4中的數據得到不會明顯干擾動物正常生理的采血體積的簡易參考指南,見表5。
      采血部位
          靜脈穿刺和靜脈切開的部位主要考慮用于嚙齒類動物和家兔。根據采血程序的技術進展對該信息進行了總結;每種種屬的采血部位的優勢和缺點見表6,重復采樣的推薦部位總結于表7。
      值得注意的是從不同部位采集的樣品在臨床病理數據方面可能有所不同,且對歷史數據庫有影響。對于更加傳統的采血途徑,可從標準文獻中找到方法學描述。但是,對需要特別提及的其它方法綜述如下。
      跗外側靜脈(隱靜脈)該技術已經在許多實驗動物中應用,包括大鼠、小鼠、倉鼠、沙鼠、豚鼠、雪貂、水貂以及體型較大的動物,可以采集占循環血容量5%的血量。該方法不要求麻醉,因此特別適用于重復采血,如藥代動力學研究。隱靜脈在跗骨關節的旁邊,當刮去被毛并用酒精擦拭后很容易看見。將動物置于合適的固定器上,比如塑料試管,操作者分開動物的后肢。在關節上輕輕施壓則該靜脈凸起,然后采用能夠滿足快速取血而不會引起溶血的最小號的針頭刺入血管(25–27G針頭適用于大鼠和小鼠)。對少量采血而言,可以采用簡單的刺傷從而在刺傷部位快速形成血滴,此時可使用微量血細胞比容試管收集標準體積的血液。采血后,在刺傷部位施加足夠的壓力以止血。剝去結痂可連續取血。
      除頑固性(很少)出血外,目前看來沒有并發癥報道,該方法的優勢在于不需麻醉。即使沒有根據體重增長、晝夜活動規律、行為等進行過有關動物福利的研究,但看來該途徑不大可能嚴重影響動物的健康。
      耳緣靜脈/耳中央動脈:從耳緣靜脈采血最常用于家兔和豚鼠。該途徑也可在小型豬中選用,通常與靜脈內套管結合使用。必須進行良好的固定,在采血前大約20–30分鐘應用局麻膏劑有助于防止針頭穿透皮膚時動物頭部出現搖擺。也可用凡士林涂在靜脈的表面,然后刺破靜脈用試管收集血液。如果取血量較大,則可通過家兔耳中央動脈取血,但取后必須按壓至少2分鐘以止血和防止血腫。持續性放血510分鐘后應對動物進行檢查。使用留置套管能夠重復從該動脈采血,因此有利于超過8小時的動力學研究。
          舌下靜脈:該操作在嚙齒類動物如大鼠中易于進行且適合于較大體積(0.2–1 ml)的頻繁性采血,僅受限于采血體積和必要的重復性麻醉。一種簡化的方法避免了以前的方法中所見到的缺點且能夠用于重復性采血。大鼠麻醉后,由助手握持住大鼠,使其處于仰臥位。聚攏頸背部松弛皮膚以便部分阻塞靜脈血從頭部回流。第二名操作者用頂端被棉花包裹的涂抹棒輕輕拉出舌頭,用拇指和食指抓住舌頭,用23–25G皮下注射針頭刺破舌下靜脈之一(中線的左右側各有一根舌下靜脈),盡可能靠近舌尖。將大鼠翻轉以便于血液流入試管中,采集到需要量的血后,松開施加在后頸部的壓力,將動物置于仰臥位。再次將舌頭拉出用頂端被干棉花包裹的涂抹棒止血;通常沒有必要使用任何抗凝劑。
      采用該技術,大鼠在攝食和飲水或體重增長方面與未采血的麻醉對照動物相比沒有明顯差異。此外,該法較眼球后采血所引起的病理變化更少。但是,麻醉可能仍然是一個限制性因素。
      尾側靜脈:原則上該途徑與跗外側靜脈相似,但傾向于獲得較小的采血量(小鼠0.1–0.15 ml;處于暖和條件下的大鼠最高可達2ml)??梢酝ㄟ^注射器/針頭或刺穿尾側靜脈采血。由于勿需麻醉,這使得該途徑特別適用于重復采血。有必要使血管擴張以促進血流,可以將動物暴露于37°C的溫度中共5–8 min或加熱尾部。該方法損傷很小,基本不會影響動物健康,但在加熱時必須嚴密監測動物的不適癥狀。
      顱大靜脈:小型豬可以用繩套固定或將其前肢后縮固定于其背部。農業上有時采用的其它方法(捆綁嘴部、捆綁豬軀干、通過后肢懸吊)會引起動物緊張,因此不適用于實驗動物,因為會對研究的科學性產生潛在的不利影響。為避免損傷迷走神經,應將針頭插入頸部右側,胸骨柄旁,以30–45°角向左肩方向進針。當針頭進入血管的時候通過取樣器可以覺察到破裂的感覺,然后可以輕易地采集到血樣。該方法亦被用來作連續性靜脈穿刺,但抽出針頭后穿刺部位形成血腫,因此在不要求每周頻繁采血的情況下,該方法為一種最佳候選程序。
      尾尖切斷術(斷尾法):該技術通常用于大鼠和小鼠,采血量為0.1–0.2ml。切斷術應僅限于尾尖(每次0.5–1mm應當足夠,隨試驗需要最多只能切除5mm),通過去除血凝塊可在短期內重復采血??擅黠@縮短尾部(如>5mm)的連續性切斷術不能被接受。該技術不適合老齡動物。建議對動物進行麻醉。
      心臟穿刺:該方法通常在麻醉條件下進行,在過去由于缺乏替代途徑,因此被用于對小型嚙齒類動物采血。但是,現在有其它方法可供利用,并且由于潛在性疼痛和致命性后遺癥,如心包出血以及心臟壓塞,因此該技術應僅用于末期采血。
      眼球后靜脈叢:研究者過去普遍采用眼球后采血途徑,但會引起的不良反應。因為這些不良反應及其潛在的嚴重性,因此該方法所涉及到的利害關系正日漸突出。但是,最近已開發出其它符合科學性要求的方法,由此改善了動物福利。然而,技術小組感到在新方法的上下文中應詳細回顧眼球后采血的優勢和缺點。
      對于所有種屬的靜脈叢采血均應該在常規麻醉條件下進行,在某些國際注冊中要求對動物進行麻醉。大量工作者對該方法均進行了詳盡的描述。
      僅有少量有關簡化該方法的研究工作被公開。作為穿透結膜的最佳方法以盡量減輕組織損傷的途徑(從腹側、背側和上方進入大鼠眼球)已有所討論。在同一部位的兩次采血之間必須有2周間隔期以使損傷組織可以在大多數情況下恢復,但這并不意味著動物在完全恢復前的早期不會經歷某些不適。然而某些研究已表明重復眼窩采血不會長期影響動物的晝夜節律或眼窩組織結構(如這兩篇文獻中的研究均表明任何組織損傷均痊愈),其它研究發現了組織變化、異常臨床表現和明顯不適,從而出現人道立場不得不處死動物從而給研究工作帶來損失。該方法還存在其它嚴重的潛在性不良反應:
      (i)引起血腫和眼壓過高的眼球后出血,必定會使動物感到疼痛;
      (ii)任何為止血而施加的壓力(如壓迫眼部)或來源于血腫的壓力均能導致角膜潰瘍、角膜炎、角膜翳形成、眼球破裂和小眼畸形;
      (iii)視神經和其它眼窩內結構損傷可導致視力降低甚至失明;
      (iv)毛細管引起眼眶脆骨骨折和神經損傷;伴玻璃體液丟失的眼球自身穿通傷。
      許多這些位于眼窩深處的有害后遺癥可能仍然未被發現。有害副作用的發生率差異似乎介于1%2%之間,但出于所采用的技術不同,該發生率可能遠高于此,即使是經驗豐富的實驗操作人員(見參考文獻55中的表1)。
      穿刺頻率
      盡量減少穿刺次數從而取得良好的科學性數據這一點非常重要。不應使用同一穿刺部位,如沿著靜脈采用不同的穿刺點。
      套管
      對于重復取血而言這是一項非常重要的技術。在短期(工作日)采血中可使用臨時性套管如蝶形針和套管針,然而對于長期取血而言,有必要通過外科手術植入生物排斥性套管。這些方法允許重復采血,且盡量減輕了動物的痛苦和不適。也可利用皮下靜脈輸液港的作用,植入該裝置的動物可與其同類呆在一起,但應該強調的是,該方法存在如下大量潛在性問題:
      (i)外科手術技巧為基本要求,必須在無菌條件下進行以使動物長期性保持良好的狀態及避免并發癥如感染。血凝塊頻繁出現并可能影響采血和延長藥物的輸液時間;
      (ii)可能有必要固定動物或單獨飼養以防止套管脫落或引起刺痛,這就是在長期采血中首選套管法的原因;
      (iii)長期植入套管后,可出現血管滲透且動物亦可能因此沿植入的套管而長出自身的套管。
          麻醉
      BVA/FRAME/RSPCA/UFAW的首次報告中給出了某些關于不同的麻醉對脾被膜(有該組織存在的情況下)肌細胞的影響程度的評論以及其它有助于采血的方法。對于小型實驗室哺乳動物的采血,值得注意的是聯用芬太尼和氟阿尼酮(麻醉藥Hypnorm)加或不加咪達唑倫(鎮靜藥Hypnovel)在所有種屬中均明顯引起外周血管擴張。盡管這有利于采血,但亦更容易出現采血后血腫,因此應特別注意止血。應考慮使用局麻藥。
          結論和建議
          對所有動物種屬的采血現在均有一定的替代性方法,特別是較小的嚙齒類動物,而在過去不易做到。此外,某些方法需要麻醉或有害副作用的發生率較高,可能嚴重影響動物的福利,特別是要求重復取血時。因此我們提出如下建議:
      (i)推薦的對所有嚙齒類動物采血的途徑為尾側靜脈、舌下靜脈和跗外側靜脈,家兔采用耳緣靜脈、耳中央動脈和頸靜脈;
      (ii)眼球后采血并恢復僅適用于無法采用其它途徑時;
      (iii)心臟采血僅作為終末處死動物時在麻醉條件下進行。
      最后,我們想強調的是在所有與動物有關的實驗過程中,加強培訓和人員的能力對于成功采血、最小化組織損傷以及對于動物的健康和福利是至關重要的。
       
      參考文獻
      1 符合良好規范的給藥體積(以及可能的最大給藥體積)a
       
      種屬
      給藥途徑和體積(ml/kg-1)
      經口
      皮下
      腹腔
      肌肉
      靜脈內(團注)
      靜脈內(緩慢注射)
      小鼠
      10(50)
      10(40)
      20(80)
      0.05b (0.1)b
      5
      (25)
      大鼠
      10(40)
      5(10)
      10(20)
      0.1b(0.2)b
      5
      (20)
      家兔
      10(15)
      1(2)
      5(20)
      0.25(0.5)
      2
      (10)
      5(15)
      1(2)
      1(20)
      0.25(0.5)
      2.5
      (5)
      短尾猴
      5(15)
      2(5)
      c(10)
      0.25(0.5)
      2
      c
      絨猴
      10(15)
      2(5)
      c(20)
      0.25(0.5)
      2.5
      (10)
      小型豬
      10(15)
      1(2)
      1(20)
      0.25(0.5)
      2.5
      (5)
      a:對于非水性注射液,在再次給藥前應考慮吸收時間。每日所使用的肌肉注射部位應不超過兩個。皮下注射部位不包括給予弗氏佐劑。
      b:每個部位的注射體積以毫升表示。
      C:無可用數據。
       
      2. 重復靜脈內輸液: 給藥體積/速度(以及可能的最大給藥體積/速度)a
       
      每日輸液時間
      小鼠
      大鼠
      家兔b
      短尾猴
      小型豬
      每日總體積(ml/kg)
      4小時
      Lc
      20
      Lc
      20
      Lc
      Lc
      24小時
      96(192)
      60(96)
      24(72)
      24(96)
      60
      24
      速度(ml/kg/h)
      4小時
      Lc
      5
      Lc
      5
      Lc
      Lc
      24小時
      4(8)
      2.5(4)
      1(3)
      1(4)
      2.5
      1
      a:非水性注射液見正文。某些情況下顯示了兩套數據。括號內的數據為可能的最大值。
      b:基于致畸性研究。
      c:無可用數據。
       
      3 實驗動物的循環血容量
       
      種屬
      血容量(ml/kg)
      推薦的平均值a
      平均值范圍
      小鼠
      72
      63-80
      大鼠
      64
      58-70
      家兔
      56
      44-70
      (Beagle)
      85
      79-90
      短尾猴(恒河猴)
      56
      44-67
      短尾猴(獼猴)
      65
      55-75
      絨猴
      70
      58-82
      小型豬
      65
      61-68
      a:推薦的平均值相當于平均值范圍中的中間值。
       
      4 體積限度和恢復期
       
      單次采血(如毒性研究)
      多次采血(如毒性研究)
      采血量占循環血容量
      百分比(%)
      大致恢復期
      24小時內采血量占
      循環血容量百分比(%)
      大致恢復期
      7.5%
      1
      7.5%
      1
      10%
      2
      10–15%
      2
      15%
      4
      20%
      3
       
      5 指定體重種屬的總血容量和推薦的最大采血量
       
      種屬(體重)
      血容量(ml)
      7.5%(ml)
      10%(ml)
      15%(ml)
      20%(ml)
      小鼠(25g)
      1.8
      0.1
      0.2
      0.3
      0.4
      大鼠(250g)
      16
      1.2
      1.6
      2.4
      3.2
      家兔(4kg)
      224
      17
      22
      34
      45
      (10kg)
      850
      64
      85
      127
      170
      短尾猴(恒河猴)(5kg)
      280
      21
      28
      42
      56
      短尾猴(獼猴)(5kg)
      325
      24
      32
      49
      65
      絨猴(350g)
      25
      2.0
      2.5
      3.5
      5
      小型豬(15kg)
      975
      73
      98
      146
      195
       
      6 不同采血方法的優點和缺點總結
       
      采血途徑
      普通麻醉
      組織損傷a
      重復采血
      體積
      種屬
      頸靜脈
      +++
      大鼠、犬、家兔
      頭靜脈
      +++
      短尾猴、犬
      隱靜脈/跗外側靜脈
      ++(+)
      小鼠/大鼠、絨猴/短尾猴、犬
      耳緣靜脈
      (局麻)
      +++
      家兔、小型豬
      股靜脈
      +++
      絨猴/短尾猴
      舌下靜脈
      +++
      大鼠
      尾側靜脈
      ++(+)
      大鼠、小鼠/絨猴
      耳中央動脈
      (局麻)
      +++
      家兔
      顱大靜脈
      +++
      小型豬
      尾尖切斷術(1–3mm)
      中度
      受限
      +
      小鼠/大鼠
      眼球后靜脈叢
      中度/
      +++
      小鼠/大鼠
      心臟b
      中度
      +++
      小鼠/大鼠/家兔
      a:組織損傷的可能性基于其可能的發生率以及任何后遺癥的嚴重程度,如炎癥反應或組織學損傷
      b:僅在最終處死動物時于麻醉條件下進行。
       
      7 推薦的重復采血部位
       
      種屬
      推薦部位
      小鼠
      隱靜脈、尾側靜脈
      大鼠
      隱靜脈、尾側靜脈、舌下靜脈
      家兔
      耳緣靜脈、耳中央動脈、頸靜脈
      頭靜脈、頸靜脈、隱靜脈
      短尾猴
      頭靜脈、隱靜脈、股靜脈
      絨猴
      股靜脈、隱靜脈
      小型豬
      顱大靜脈
       
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